Pracovní princip Pasteurovy pipety je primárně založen na gravitačním{0}}průtoku a kapilárním působení v kombinaci s ručním ovládáním rozdílů tlaku vzduchu, aby se usnadnilo nasávání a přenos kapalin.
Manuální ovládání sání: Obsluha aplikuje sání na široký konec pipety-buď orálně, nebo pomocí pomocné gumové kuličky-, aby se vytvořil podtlak ve zkumavce, čímž se nasává kapalina do jemné špičky.
Dávkování řízené gravitací-: Po uvolnění sání kapalina přirozeně vytéká pod vlivem gravitace; dávkování lze také usnadnit jemným zmáčknutím těla pipety nebo nakloněním přijímací nádobky.
Reprodukovatelnost kapek: Kalibrací poměru „kapek na mililitr“ umožňuje pipeta přibližný kvantitativní přenos, díky čemuž je vhodná pro postupy, které vyžadují opakovatelnost spíše než absolutní přesnost.
Zajištění sterility: Před použitím lze do širokého konce zasunout vatovou zátkou a sterilizovat, aby se zabránilo mikrobiální kontaminaci během manipulace-, což je postup zvláště obvyklý při mikrobiologických experimentech.